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人脂肪來源的干細胞原代分離培養操作方案
發布時間： 2026-07-03 點擊次數： 62次具體流程如下：
1. 取臨床來源人體脂肪組織稱重，添加含 2% 雙抗的 PBS 溶液洗滌 3 次；
2. 無菌條件下使用眼科剪，將脂肪組織剪至體積約 1mm3的細小組織塊；
3. 加入5mL I型膠原酶，置于 37℃、80rpm 搖床消化 50～60 min；
4. 加入等體積wan全培養基中和膠原酶，終止消化反應；
5. 采用 70μm細胞篩過濾懸液，除去未充分消化的結締組織與細胞團；
6. 室溫條件下 1800 rpm 離心 10 min；
7. 離心后上層漂浮大量脂滴，先用吸管吸取大部分脂滴，再棄去全部上清；
8. 配制wan全培養基（DMEM/F12 + 10% 胎牛血清 FBS + 1% 雙抗）重懸細胞沉淀；
9. 細胞懸液接種至培養器皿進行培養；
10. 接種 48 h 后進行換液；
11. 后續常規每周更換 2 次培養液；
12. 持續培養 7～10 d，脂肪干細胞逐步達到細胞融合狀態。
